pcr儀具體應如何使用呢?以下小編為您詳細說明:
(1)向一微量離心管中依次加入
dna模板102-105拷貝
引物 各1μmol/l
dntp各200μmol/l
10×pcr緩沖液1/10體積
ddh2o補到終體積(終體積50μl-100μl)
(1)混勻后,離心15s使反應成分集于管底。以上步驟僅在實驗研究用,現在商品化試劑已將dntp、10×pcr緩沖液,引物,ddh2o混合在一起,反應體積為20-25μl,只要試驗人員加入處理好的樣品就可以了。
(2)加石蠟油50-100μl于反應液表面以防蒸發。置反應管于97℃變性10min。
(3)冷至延伸溫度時,加入1-5u taq dna聚合酶,離心30s使酶和反應液充分混合?,F在臨床使用試劑酶通常已加入反應液中。
(4)pcr儀的循環程序為:94℃變性30s,55℃退火20s,然后在72℃延伸30s,共循環30-35次。第35次循環結束后,再將反應管置72℃溫育5min,以確保充分延伸。