有不少用戶對有口碑的凝膠成像非常感興趣。同時發現大家對怎樣選擇多色熒光凝膠成像系統,多不甚清楚,在是選擇多色熒光凝膠成像還是化學發光凝膠成像這個問題上,有些糾結。為此,希望僅以有限的知識在此為大家拋磚引玉,希望能對今后的選擇提供些建議。首先,先分別對化學發光成像和多色熒光凝膠成像的特點和應用做簡要介紹。
一、化學發光凝膠成像的特點:
傳統的化學發光檢測方法通常需要膠片成像,膠片成像可以保證較高的靈敏度,但也有很多缺點,比如耗時,需要暗房和顯影劑,膠片很貴,而且需要很多消耗品,需要持續購買。另外,用膠片上的蛋白條帶進行定量也是幾乎不可能,和目測一塊考馬斯藍染的膠沒什么區別,而且膠片成像時間只能預先設定,如果曝光過度或者不足則需要再次進行實驗,非常麻煩。
凝膠成像系統的出現極大克服了傳統膠片法的一些弊端,近年來隨著冷卻CCD技術的發展,數字成像系統成本越來越低,成像效果同時獲得大大提升,因而凝膠成像系統逐漸成為了實驗室WesternBlot的主要設備。同時目前很多Westernblot的新技術也都是針對CCD成像系統的,目前CCD成像系統的靈敏度已經可以達到甚至超過傳統的膠片成像?;瘜W發光凝膠成像與X膠片相比具有瞬時影像處理、高靈敏度、高分辨率、動力學范圍廣等優點,而且還不需要膠片處理裝置、后續耗材投入及暗室。
二、多色熒光凝膠成像的特點
在做westernblot的檢測時,有時會碰到電泳后兩個分子量相近的蛋白分離不開,距離相近或者重疊,例如磷酸化和非磷酸化的蛋白;或者是同一次實驗中,檢測一種以上的蛋白抑或是利用內參蛋白對目的蛋白的定量分析進行標準化。遇到以上這樣的實驗需求,化學發光凝膠成像的檢測方法會顯得繁瑣復雜,其必須經過剝脫抗體和重行孵育新抗體的過程,不僅耗時費力,而且不能進行精確的定量分析,由此多色熒光成像的技術應運而生。多色熒光凝膠成像,是利用不同的熒光染料標記二抗,標記不同熒光染料的二抗分別對應不同的目的蛋白,以此實現通過檢測不同熒光染料的信號強度,間接實現一次實驗可檢測多種蛋白,同時也可以進行精確的定量分析。
通過上面的介紹,我們知道多色熒光凝膠成像系統,同化學發光凝膠成像系統一樣,無論是什么牌子的凝膠成像,它都是WesternBlot檢測分析儀器的一種,它很好的解決了化學發光凝膠成像系統不易解決的問題,某種程度上,可以認為它是化學發光凝膠成像的一個很好的補充,如此一來,選擇多色熒光凝膠成像系統還是化學發光凝膠成像的問題,也就不再糾結